洋葱亚细胞定位培养-亚细胞定位-思特进科技发展公司

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。

本研究旨在通过对根癌农侵染洋葱表皮细胞的条件进行优化，从而建立一种新的瞬时表达系统，洋葱亚细胞定位公司，并将其应用于玉米In5-2启动子的功能区域的分析中，亚细胞定位，明确In5-2启动子的乙酰类化合物诱导元件的具体位置。在本研究中采用根癌农(A grobacterium tume faciens)侵染洋葱(Allium cepa)表皮细胞，对转β-葡糖醛酸酶(GUS)基因的瞬时表达进行研究，并分析了侵染液中乙酰丁香酮(As)的浓度、侵染时间、菌液浓度、共培养时间对GUS基因的瞬间表达的影响。结果显示，在OD600值为0.8的农液中15min，共培养3d，能够得到较高的GUS基因瞬间表达，从而建立了一种新的瞬间表达系统。同时，构建了含不同长度的玉米(Zeamays)In5-2启动子片段缺失载体，利用新的瞬时表达系统分析其功能区域，推测出乙酰类化合物诱导元件位于ATG上游-220～-143bp之间。结果表明新的瞬时表达系统可以快速有效地进行启动子的分析。

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GaMYB2 在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析：采用基因轰击的方法，用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击，暗培养过夜后，在激光共聚焦显微镜下进行观察，从图A 中可以看出对照GFP空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光，为组成型表达；从图B 中发现GaMYB2-GFP 的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光，洋葱亚细胞定位培养，这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构，定位在细胞核中，具有转录因子的一般特征。

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