江苏动物组织原位杂交 思特进

原位杂交中探针的选择

DNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短，因此避免了探针内部退火的问题，在杂交时的渗透能力也更好，探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。DNA探针、RNA探针在合成时需要控制探针片段长度，通常300-1000bp左右，能覆盖到较长片段的靶核酸序列，增加检测的灵敏度。

就DNA探针和RNA探针的比较，DNA探针在杂交过程中会出现探针双链之间退火的可能，也更倾向于在溶液中形成大分子的探针聚合体，从而影响其渗透能力。而RNA 探针的应用，将提高DNA-RNA杂交子的热稳定性。

Tips：RNA探针因其单链、高分子结合力、可适应高温杂交的特性，其检测特异性和灵敏度均优于DNA探针。常用的RNA探针标记方法为构建质粒后进行转率合成。通过PCR扩增的方法，可以更方便地进行RNA探针的制备；RNA探针合成后，还需验证其对目标片段检测的灵敏度和特异性。

原位杂交组织（或细胞）化学技术简称原位杂交（In situ hybridization, ISH）是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织细胞内待测的核酸，按碱基互补配对原则进行特异性结合，形成杂交体，然后用与标记物相应的检测系统，通过组织化学或免3疫组织化学方法在核酸原有位置进行细胞内定位、定性和定量研究。为分子水平研究细胞内基因表达及有关细胞5因子的调控提供了有效的工具。可视为组织化学与免3疫组织化学的重大突破。

原位杂交不需要从组织中提取核酸，对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性，并可完整地保护组织和细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。